Сконструирована новая экспрессионная система на основе штамма B . megaterium PV 370. Ген новой рибонуклеазы Bacillus sp .( RBT ) клонирован под контроль сильного Pspac промотора, транскрипция которого индуцируется изопропил- β - D -1-тиогалактопиранозидом (ИПТГ). Полученная векторная система позволит сократить время синтеза фермента и увеличить его выход в несколько раз в сравнении с природным продуцентом. Результаты проведенной работы могут служить основой для последующего выделения и очистки рекомбинантного белка RBT в препаративных количествах с целью исследования его биологических свойств.
биназа, рибонуклеаза Bacillus sp, Bacillus megaterium PV370, binase, ribonuclease from Bacillus sp, Bacillus megaterium PV370
1. Ильинская О.Н., Макаров А.А. Почему рибонуклеазы вызывают гибель раковых клеток // Молекулярная биология. 2005. Т. 39. № 1. С. 3 - 13.
2. Deutscher M.P., Li Z. Exoribonucleases and their multiple roles in RNA metabolism // Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 2001. V. 66. P. 67 - 105.
3. Ulyanova V.V., Vershinina, V.I., Ilinskaya O.N. Barnase and binase: twins with distinct fates // FEBS J. 2011. V. 278. P. 3633 - 3643.
4. Эдельвейс Э.Ф. Иммунобарназные конъюгаты для диагностики и терапии рака // Институт биоорганической химии. Москва. 2010. 196 л.
5. Mikulski S.M. et. al. Phase II trial of a single weekly intravenous dose of rapirnase in patient with unresectable malignant mesothelioma // J. Clin. Oncol. 2000. V. 20. P. 274 - 281.
6. Leland P., Raines R. Cancer chemotherapy - ribonucleases to the rescue // Chemistry and Biology. 2001. V.8. № 5. P. 405 - 413.
7. Sevcik J., Urbanikova L., Leland P.A., Raines R.T. X-Ray structure of two crystalline forms of a Streptomycete ribonuclease with cytotoxic activity // J. Biol. Chem. 2002. V. 277. № 49. P. 47325 - 47330.
8. Cabrera-Fuentes H.A. et. al. Internalization of Bacillus intermedius ribonuclease (binase) induces human alveolar adenocarcinoma cell death // Toxicon. 013. Mitkevich V.A. et. al. Sensitivity of acute myeloid leukemia Kasumi-1 cells to binase toxic action
9. depends on the expression of KIT and АML1-ETO oncogenes // Cell Cycle. 2011. V. 10. P. 4090 - 4097.
10. Деменьтьев А.А., Орлов В.М., Шляпников В.М. Полная первичная структура рибонуклеазы бактерии Bacillus thuringiensis // Биоорганическая химия. 1993. Т. 19. С. 853 - 861.
11. Шульга А.А. и др. Рибонуклеаза из Bacillus thuringiensis var. subtoxicus // Биоорганическая химия. 2000. Т. 9. С. 673 - 679.
12. Морозова О.В., Регуляция биосинтеза внеклеточных гуанилспецифичных рибонуклеаз Bacillus circulans и Bacillus thuringiensis : автореф. дис.канд. биол. наук : 03.00.07. Казань. 2000. C. 23.
13. Sarkar S., Choudhuri S., Basu T. Curr. Sci. 2002. Р. 1376 - 1380.
14. Sambrook J., Rusell D. W. Molecular Cloning. 3rd ed.Cold Spring Harbor Laboratory Press: New York. 2001. V. 1. Р. 1 - 59
15. Anagnostopoulos С., Spizizen J. Requirements for transformation in Bacillus subtilis // J. Bacteriol. 1961. V. 81. P. 741 - 746.
16. Jeffris G.D., Holtman W.F., Guse D. Rapid method for determining the activity of microorganisms on nucleic acids // J. Bacteriol. 1957. V. 73. P. 61 - 79.
17. Деменьтьев А.А. и др. Внеклеточная щелочная рибонуклеаза Bacillus thuringiensis var. subtoxicus // Молекулярная биология. 1992. Т. 26. Вып. 6. С. 1338 - 1349.
18. Vary P.S. et. al. Bacillus megaterium-from simple soil bacterium to industrial protein production host // Applied Microbiology and Biotechnology. 2007. V.76. P. 957 - 967
